用于抑制口腔病原菌的乳酸菌菌株的食品、口腔清洁以及医药组合物

近日，锦旗生物申请“用于抑制口腔病原菌的乳酸菌菌株的食品、口腔清洁以及医药组合物”发明专利获批（中国发明专利ZL 2017 1 1155468.8）。此专利采用选自鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）F-1菌株、唾液乳杆菌（Lactobacillus salivarius）AP-32菌株、罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）GL-104菌株、副干酪乳酸杆菌（Lactobacillus paracasei）GL-156菌株、瑞士乳杆菌（Lactobacillus helveticus）RE-78菌株、鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）CT-53菌株和副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）ET-66菌株群组至少一个分离的乳酸菌菌株，具有抑制口腔内致病菌生长作用，是减少龋齿、美白牙齿，改善口气等问题的新解决方案。

在全球，约35.8亿人患有口腔疾病，其中龋齿是最常见的口腔问题。在中国，35~44岁的中年人龋齿比例为88.1%，而65~74岁的老年人群中，龋齿率高达98.4%。

同时，在2020年，全球口腔护理市场份额约为438.292亿美元，即2853.8亿人民币，且复合年增长率为4.8%。而在中国，口腔护理市场份额约为484亿人民币，并保持着10%的复合年增长率。

常见的口腔问题包括龋齿，牙结石，牙菌斑，牙龈出血，牙本质敏感，牙齿不洁白，口气等。因此，口腔问题具有症状多，病因杂，治疗麻烦等特征，甚至有些口腔问题是不可逆的。而引起口腔问题的最主要因素为口腔致病菌。例如：变形链球菌会造成龋齿；具核梭杆菌多型亚种会造成牙周病、口臭及结肠癌等问题；放线共生放线杆菌会引起牙周炎、口腔发炎及肺炎。同时，不仅是口腔疾病，作为食物进入人体的首个通道，阿尔兹海默症、心血管疾病、囊状纤维化、大肠癌、食道癌、糖尿病和类风湿性关节炎都和口腔问题相关联。因此，口腔问题已经成为一个重要的中国公共卫生问题。

本发明所描述的乳酸菌菌株的冷冻干燥培养物寄存在中国典型培养物保藏中心以及中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。经研究结果证实的主要功能如下：

在食品组合物和医药组合物中，乳酸菌菌株的数量不应该低于1×10⁶ CFU；更甚者，可以达1×10¹⁰ CFU以上。

发明名称：用于抑制口腔病原菌的乳酸菌菌株的食品、口腔清洁和医药组合物

ZL 2017 1 1155468.8发明专利说明书中指出

[0001] 本发明是有关一种食品组合物、口腔清洁组合物和医药组合物，特别是一种包含能抑制口腔病原菌的乳酸菌菌株的食品组合物、口腔清洁组合物和医药组合物。

[0002] 婴幼儿乳牙的健康会影响到未来的恒久齿的生长，因此，从婴儿时期开始，口腔清洁就十分重要。细菌容易附着于牙龈表面，若口腔上有细菌滋生，待乳齿长出后会直接附着于婴儿的乳齿上并造成龋齿。因此，乳牙是一切牙齿的基础，因为乳牙可为未来恒久齿的生长提供适当的空间及距离。若乳牙没有照顾好，放任乳牙产生龋齿，龋齿会导致未来恒久齿生长的空间严重丧失，且将来恒久齿在发育时，周围都将是细菌与脓包，这种环境会导致新长出来的牙齿更容易形成龋齿，甚至影响成年及老年时期的牙周病发生率。

[0004] 一般食用含乳酸菌(LAB)的产品仅具有调整肠道健康的效果。自然界中虽然有数以万计的乳酸菌菌株存在，但目前仅发现少数乳酸菌菌株可能具有维护口腔健康及美白牙齿的潜在性附属特质。而这些菌株所具有的抑制口腔病原菌、吸附口腔黏膜表皮细胞、在洁牙产品中是否仍能维持抑制病原菌及产生过氧化氢的能力等特异性性质，是激发菌株在口腔展现功能，控制口腔中的微生态平衡、筛选有维护口腔健康及美白牙齿功能的功能性菌株时的重要依据。

[0005] 文献指出，益生菌可以通过与病原菌竞争贴附的生存区域和营养，促进病原菌产生聚集特性，并分泌抑菌物质使得病原菌变得虚弱或甚至杀死病原菌的方式，来达到减少口腔病原菌数量并维持口腔健康的功效，同时分泌过氧化氢来达到去除口腔气味和美白牙齿的目的。

[0006] 时至今日，仅有少数菌株经实验过程发现具备有维持口腔健康和美白牙齿的活性效果的乳酸菌菌株被确认。而乳酸菌对身体健康的功能在于菌株(strain)的特异性而非菌种(species)，此种对于人的身体健康有特殊功效的菌株被称为功能性益生菌(Guidelines for the evaluation of probiotics in food;Report of joint FAO/WHO working group on drafting guidelines for the evaluation of probiotics in food;London Ontario,Canada April 30 and May 1,2002:1-7)。

[0007] 综上所述，开发具有抑制口腔病原菌活性效果的功能性益生菌 是目前需努力的目标。

[0008] 本发明提供一种含乳酸菌菌株的食品组合物、口腔清洁组合物和医药组合物，其可以通过抑制口腔病原菌的生长来维持口腔健康。

[0015] 本发明所描述的乳酸菌菌株的冷冻干燥培养物寄存在中国典型培养物保藏中心以及中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

[0018] 在食品组合物的实施例中，生理上可接受的赋形剂或稀释剂可为食品，举例而言，食品可包含但不限于乳制饮品、茶、咖啡、口香糖及洁牙糖 （例如口含片、咀嚼锭、软糖等）、宠物用肉干或以上各项的组合，其中乳制饮品可包含发酵乳、酸奶、奶酪或乳粉。在口腔清洁组合物的实施例中，赋形剂或稀释剂可为牙膏、洁牙粉、漱口水、口气清新喷雾、涂氟剂（例如涂抹于幼儿牙齿上的氟剂）、假牙清洁剂、宠物用洁牙胶或宠物用化毛膏等；载体可为牙刷、牙间刷、牙线、口腔棉棒或宠物用洁牙骨等。医药组合物可包含口服剂型或外用剂型。举例而言，口服剂型可为锭剂、胶囊、溶液剂及粉剂等。

具有特异性性质的个别乳酸菌菌株不但可以抑制龋齿菌和牙周菌之外，还能通过和口腔致病菌竞争在口腔黏膜中的生存空间和营养，致使口腔病原菌的凝集而排除。因此，通过实验检测本发明选用的乳酸菌对口腔病原菌的抑制能力来验证本发明对口腔问题的缓解作用。

将待测益生菌放在加入了三甲基硼(0.25mg/ml)和辣根过氧化物酶(0.01mg/ml)的平板上培养，利用聚落周围的颜色和过氧化氢感测试纸侦测乳酸菌菌体及二次代谢物含有的过氧化氢浓度。

实验结果显示本发明的鼠李糖乳杆菌F-1菌株、唾液乳杆菌AP-32菌株、罗伊氏乳杆菌GL-104菌株、副干酪乳杆菌GL-156菌株、瑞士乳杆菌RE-78菌株以及鼠李糖乳杆菌CT- 53 菌株皆能够分泌过氧化氢。但是，这些菌株的代谢产物中，只有唾液乳杆菌AP-32菌株、罗伊氏乳杆菌GL-104菌株、瑞士乳杆菌RE-78菌株、鼠李糖乳杆菌CT- 53 菌株能将分泌的过氧化氢扩散至液体中。而鼠李糖乳杆菌F-1菌株、唾液乳杆菌AP-32菌株、罗伊氏乳杆菌GL-104菌株、瑞士乳杆菌RE-78菌株、鼠李糖乳杆菌CT- 53 菌株将过氧化氢存留在菌体内，使菌体本身带有过氧化氢。

将本发明中使用的乳酸菌和口腔致病菌(变形链球菌、具核梭杆菌多型亚种、放线共生放线杆菌、牙龈卟啉单胞菌17和牙龈卟啉单胞菌18)在37°C环境中共同培养2-4天，然后计数病原菌的数量。